BARTONELLA HENSELAE TARAFINDAN UYARILAN ANJİOGENEZİN, İN VİVO MODEL OLARAK YUMURTA AÇIĞINDA, KABUKSUZ TAVUK EMBRİYOSU KÜLTÜRÜ ÜZERİNDE, KORYOALLANTOİK MEMBRANDA GÖSTERİLMESİ
Çağrı Ergin, A. Çevik Tufan, Cansev Yılmaz
ÖZET
Amaç: Bartonella henselae tarafından uyarılan anjiogenez (BIA) HUVEC (Human umbilical vein endothelial cells) gibi modellerde in vitro olarak gözlemlenebilmektedir. Anjiogenezin kanser ve ilaç araştırmalarında araştırıldığı farklı in vivo modellerden biri de koryoallantoik membran (CAM) modelidir. Bu araştırmada, daha önceden onkolojik anjiogenezin gösterilmesinde kullanılan YAKTEK (Yumurta açığında kabuksuz tavuk embriyosu kültürü) yöntemi CAM modeli ile birleştirilerek BIA için in vivo model olarak tanımlanmaktadır.
Materyal ve Metod: Fertilizasyondan 72 saat sonra, 37oC ve %5 CO2 ortamında inkübe edilen 8 YAKTEK modelinin her deney ve kontrol CAM bölgesine, damarların çatallanma yerlerinden 3-5 mm uzağa steril distile suda yoğun süspanse edilen 3 tane B.henselae (ATCC 49882) ile kaplanmış boncuklar bırakıldı. Boncuklar 40. ve 62. saatlerde uzaklaştırılarak altlarındaki 4 mm2’lik alanlarda oluşan yeni damarlanma yapılanmaları kontrol grupları ile karşılaştırıldı.
Bulgular: Deneyin 40. saatinde, birim alan başına, deney grubunda 22,8±1,4; kontrol grubunda 8,3±0,7 neovaskülarizasyon izlenirken, 62. saatte deney grubunda 25,6±1,8, kontrol grubunda 9,4±0,9 neovaskülarizasyon saptandı (p<0,001).
Sonuç: YAKTEK modelinde BIA varlığı gösterilmiştir. Bu modelin anjiogenez çalışmalarında kullanılması yönünden üstünlükleri bulunmaktadır. Bunlar kısaca; (a) ucuzdur, zaman ve iş gücü yönünden avantajlıdır; (b) uygulanan deney döneminde civciv embriyolarının immün sistemi aktif olmadığından ajana bağlı immün yanıt bulunmamaktadır, etki bakteriye doğrudan bağlıdır; (c) tek kültür ortamında farklı odaklarda birden fazla deney yapılabilmektedir; (d) sistemin tekrarlanabilirliği kolaydır; (e) doku eldesi ve fotoğraflama kolay ve demostratiftir. YAKTEK modelinin BIA’nın gösterilmesinde geçerli bir yöntem olduğu, anjiogenezin etyopatogenezde sorgulandığı bakteriyel etkenler içinde uygulanabileceği düşünülmüştür.
Anahtar Kelimeler: Bartonella henselae, anjiogenezis, uyarıcı ajanlar, koryoallantoik membran. Nobel Med 2012; 8(3): 108-112
DEMONSTRATION OF BARTONELLA HENSELAE-INDUCED ANGIOGENESIS USING CHORIOALLANTOIC MEMBRANE ASSAY ON SHELL-LESS CULTURE OF THE CHICK EMBRYO AS IN VIVO MODEL
ABSTRACT
Objective: Angiogenesis induced by Bartonella henselae has been demonstrated in in vitro model systems such as HUVEC (Human umbilical vein endothelial cells). However, one of the in vivo model systems allowing angiogenesis studies in cancer and drug discovery studies is the chorioallantoic membrane (CAM) model. In this study, shell-less culture of the CAM has been utilized as the in vivo model for the demonstration of Bartonella henselae induced angiogenesis.
Material and Method: Eight shell-less CAM cultures were established 72 hours after first incubation of fertilized eggs at 37oC and 5% CO2. One half of each CAM was used as the study group and in this half 3 B.henselae (ATCC 49882) soaked beads were planted in bifurcations of previously established vessels. The other half was used as a control, and sterile distilled water soaked beads were planted in bifurcations of previously established vessels. Beads were removed after 40 and 62 hours of incubation, and newly formed vessels were counted in a 4-mm2 area under each bead.
Results: Neovascularization in the study group was significantly higher than that in control group (22.8±1.4 versus 8.3±0.7, respectively; p<0.001) at 40 hours of incubation. This significance was also observed at 62 hours of incubation (25.6±1.8 versus 9.4±0.9, respectively; p<0.001).
Conclusion: Bartonella henselae induced angiogenesis has been demonstrated in shell-less culture of CAM. This model has advantages for angiogenesis studies. These include: (a) cost efficiency (eggs, time, labor, etc.); (b) no mature immune system is available in these CAMs, thus the observed effect is attributed to the bacteria tested; (c) allowing multiple tests on individual CAMs; (d) easy reproduciblity; (e) tissue sampling and photography is easily performed. Thus, shell-less culture of the CAM may be utilized in studies testing angiogenic activity of many agents including other bacteria.
Keywords: Bartonella henselae, angiogenesis, inducing agents, chorioallantoic membrane Nobel Med 2012; 8(3): 108-112
Click here to view the full-text article in PDF format.